在PCR檢測(cè)用選什么樣的超純水機(jī)?
今天帶大家走入核酸檢測(cè)的常用方法PCR方法,以及如何在PCR檢測(cè)過程中降低檢測(cè)結(jié)果假陰性概率。
一、什么是PCR技術(shù)?
PCR技術(shù)又稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。是一種放大DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),PCR最大的特點(diǎn)是能夠?qū)⑽⒘康腄NA進(jìn)行大幅度的放大,方便進(jìn)行觀察其反應(yīng)。
在今年流行的新冠病毒中核酸檢測(cè)被定義為臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn),RT-PCR技術(shù)被反復(fù)提到,它是一種將RNA反轉(zhuǎn)錄和PCR相結(jié)合的技術(shù)。首先在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下,將提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,在DNA聚合酶作用下不斷擴(kuò)增(變性-退火-延伸多個(gè)循環(huán))合成目的片段并進(jìn)行分析。
二、PCR用水
PCR技術(shù)目前多搭配試劑盒使用,也有用戶自行制備反應(yīng)體系,無論哪個(gè)過程都需要使用水。無論是近年來季節(jié)性爆發(fā)的甲流乙流,還是目前都在經(jīng)歷的病毒,在檢測(cè)過程中都涉及一個(gè)痛點(diǎn),那就是如何盡可能提高核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性,減少假陰性結(jié)果出現(xiàn)的可能性。
我們首先分析一下假陰性結(jié)果出現(xiàn)的原因,以病毒核酸檢測(cè)為例,假陰性的主要原因有:
1、病人病程:不同病程,患者體內(nèi)病毒載量不同;
2、采樣部位:咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采樣部位病毒載量均不同;
3、采樣準(zhǔn)確性:拭子質(zhì)量,工作人員操作等;
4、試劑盒的質(zhì)量:引物設(shè)計(jì)以及水質(zhì)控制。
為了順利將提取到的RNA反轉(zhuǎn)錄并實(shí)現(xiàn)DNA的成功擴(kuò)增,必須抑制核糖核酸酶(RNases)的降解作用,如果試劑盒用水內(nèi)含RNases,將極有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。
三、去除RNases的主要方法
1、高壓滅菌:即便是在180°C下高壓滅菌4h之后,RNases仍保持某些活性,且某些細(xì)菌失活會(huì)釋放更多的RNases;
2、DEPC法(二乙基焦碳酸酯處理法) 利用二乙基焦碳酸酯(DEPC) 處理方法使酶失活是用來抑制水溶液中RNases活性的常見方法。然而,二乙基焦碳酸酯是一種可疑致癌物,處理須小心:同時(shí)該方法雖然能夠使酶失活,卻無法將其從水中去除,同時(shí)清除多余的DEPC過程中,會(huì)產(chǎn)生乙醇,二氧化碳等其他污染物;
3、超濾法:超濾是一種真正能夠從水溶液中清除RNases的方法。
四、超濾膜介紹
超濾膜被大量用于水處理工程。超濾技術(shù)在反滲透預(yù)處理、飲用水處理、中水回用等領(lǐng)域發(fā)揮著越來越重要的作用。超濾技術(shù)在酒類和飲料的除菌與除濁,藥品的除熱原以及食品及制藥物濃縮過程中均起到關(guān)鍵作用。
超濾過濾孔徑和截留分子量的范圍一直以來定義較為模糊,一般認(rèn)為超濾膜的過濾孔徑為0.001-0.1微米,截留分子量(Molecular weigh cut-off, MWCO)為1,000-1,000,000 Dalton。嚴(yán)格意義上來說超濾膜的過濾孔徑為0.001-0.01微米,截留分子量為1,000-300,000 Dalton。若過濾孔徑大于0.01微米,或截留分子量大于300,000 Dalton的微孔膜就應(yīng)該定義為微濾膜或精濾膜。
一般用于水處理的超濾膜標(biāo)稱截留分子量為30,000-300,000 Dalton,而截留分子量為6,000-30,000 Dalton 的超濾膜大多用于物料的分離、濃縮、除菌和除熱源等領(lǐng)域。
五、超純水機(jī)推薦
SYZ-VF實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)具備持續(xù)的水質(zhì)監(jiān)測(cè)功能。這款產(chǎn)品的設(shè)計(jì)緊湊,外觀精美,一體化鑄成工藝,不論是穩(wěn)定性還是設(shè)備本身的剛性都得到了極大的提升,能適用于眾多的實(shí)驗(yàn)室科室選擇,是動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)、基因研究、試管嬰兒等生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室的理想選擇。
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